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【產(chǎn)品推介】MSI標準品

原載自：www.51geci.net[技術(shù)資料頻道] 2021-04-01 瀏覽次數(shù)：2185

微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（Microsatellite Instability,MSI），是指由于在DNA復制時插入或缺失突變引起的微衛(wèi)星（Microsatellite,MS）序列長度改變的現(xiàn)象，常由錯配修復功能（Mismatch repair,MMR）缺陷引起。MS序列，是一些短而重復的DNA序列，一般由1~6個核苷酸組成，串聯(lián)重復排列，常見類型為雙堿基CA/GA/GT或單堿基A/T等。MS序列可以位于基因的重要非編碼區(qū)，也可以位于基因的編碼區(qū)，多態(tài)性分布于整個基因組，個體差異大。MSI現(xiàn)象于1993年被Jacobs等人在結(jié)直腸癌中*發(fā)現(xiàn)，與癌癥發(fā)生有關，可以用于癌癥檢測。

MSI檢測方法

MSI常由MMR基因突變及功能缺失導致。因此，在檢測癌細胞中的MSI時，既可以通過檢測MMR基因缺失來確定是否發(fā)生MSI，如依賴于免疫組化技術(shù)的蛋白水平檢測，也可以直接檢測MSI的序列變化，如PCR（聚合酶鏈反應）檢測等的分子水平檢測。

（一）免疫組化方法

免疫組化方法（Immunohistochemistry, IHC）：采用免疫組織化學方法檢測腫瘤組織中錯配修復基因MLH1、MSH2、MSH6及PMS2的表達。任何一項錯配修復基因表達缺失，被定義為MSI，否則即為微衛(wèi)星穩(wěn)定（MSS）。其中一個表達缺失則稱為低度微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI-L)，2種或2種以上蛋白表達缺失為高度微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI-H)。

（二）分子水平的檢測

1.聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction, PCR)技術(shù)
目前主要采用多重熒光PCR結(jié)合毛細管電泳的方法。通過PCR方法檢測特異的微衛(wèi)星重復序列擴增判定MSI狀態(tài)，比較腫瘤患者的標本組織與正常組織的位點突變情況。其比較的位點為美國國家癌癥研究所（NCI）推薦的5個微衛(wèi)星位點：BAT25、BAT26、D5S346、D2S123及D17S250。其中≥2個位點發(fā)生改變判定為高度微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI-H），僅1個位點發(fā)生改變判定為低度微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI-L），無位點改變判定為微衛(wèi)星穩(wěn)定（MSS）。有研究認為，二核苷酸重復序列的特異性和靈敏度比單核苷酸重復序列要低，因此關于MSI檢測的位點仍存在爭議。Bacher等對266個微衛(wèi)星位點(其中包括單核苷酸、二核苷酸、四核苷酸以及五核苷酸微衛(wèi)星位點)檢測的敏感性及準確性進行評估，提出了Promega分析系統(tǒng)，該系統(tǒng)使用五個單核苷酸微衛(wèi)星位點(BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24和MONO-27)及兩個五核苷酸微衛(wèi)星位點(Penta C和Penta D)檢測MSI。大量的實驗證實，MMR免疫組化檢測結(jié)果與MS的PCR檢測結(jié)果有高度關聯(lián)性，靈敏度92%，特異性可達100%。

2.新一代測序方法（Next Generation Sequencing, NGS）
NGS又稱為第二代測序技術(shù)，是一種高通量測序技術(shù)，能一次性對幾十萬到幾百萬條基因分子進行序列測定。目前NGS方法已經(jīng)成為檢測MSI的新工具，其優(yōu)勢是可以實現(xiàn)多位點高通量檢測。紀念斯隆·凱特琳癌癥研究中心（Memorial Sloan Kettering Cancer Center，MSK）的一項研究使用NGS方法對12,288例實體瘤病人進行檢測，判定MSI狀態(tài)，并用MSI-PCR/MMR-IHC進行了驗證。實驗證明, NGS方法較MSI-PCR方法具有更高的敏感性。

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