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ATCC細(xì)胞株穩(wěn)定整合試驗(yàn)中的幾個(gè)關(guān)鍵因素

原載自:www.51geci.net[技術(shù)資料頻道]  2018-12-25  瀏覽次數(shù):2129

  ATCC細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物,也就是說(shuō),ATCC細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。
  ATCC細(xì)胞株無(wú)菌操作注意事項(xiàng):
  1.操作前要洗手,進(jìn)入超凈臺(tái)后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。
  2.點(diǎn)燃酒精燈,操作在火焰附近進(jìn)行,耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼,金屬器械燒灼時(shí)間不能太長(zhǎng),以免退火,并冷卻后才能夾取組織,吸取過(guò)營(yíng)養(yǎng)液的用具不能再燒灼,以免燒焦形成碳膜。
  3.操作動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷,但又不能太快,以防空氣流動(dòng),增加污染機(jī)會(huì)。
  4.不能用手觸已消毒器皿的工作部分,工作臺(tái)面上用品要布局合理。
  5.瓶子開(kāi)口后要盡量保持45℃斜位。
  6.吸溶液的吸管等不能混用。
  ATCC細(xì)胞株穩(wěn)定整合試驗(yàn)中的幾個(gè)關(guān)鍵因素:
  1),外源插入片段的拷貝數(shù)。多數(shù)情況下,低拷貝甚至是單拷貝可以減少人為實(shí)驗(yàn)因素的干擾。
  2),整合的幾率,這不僅決定了穩(wěn)定株篩選的難易程度,而且還可以幫助人們更容易得到混合穩(wěn)定株。
  3),整合位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄活躍度,決定了穩(wěn)定株中外源片段的表達(dá)質(zhì)量。理想的狀況是單拷貝,但轉(zhuǎn)錄活性比較高。
  4),整合后的穩(wěn)定性。不同的整合位點(diǎn)決定了外源片段在染色體中的穩(wěn)定性,有些區(qū)域易發(fā)生重組或者丟失,從而導(dǎo)致穩(wěn)定株再次丟失的情況。
  5),使用混合穩(wěn)定株或者獲得多個(gè)不同單克隆穩(wěn)定株。因?yàn)榉€(wěn)定整合往往伴隨這插入失活宿主內(nèi)源基因,所以實(shí)驗(yàn)時(shí)通過(guò)使用混合穩(wěn)定株,或者對(duì)多個(gè)單克隆穩(wěn)定株進(jìn)行比較,可以幫助研究人員獲得更的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
  凍存的ATCC細(xì)胞株和雜交腐細(xì)胞株在運(yùn)送過(guò)程中使用干冰保持低溫。收到細(xì)胞后,可以立即解凍復(fù)蘇,去除二甲基亞砜(DSMO0)后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞,必須將細(xì)胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲(chǔ)存。請(qǐng)不要將細(xì)胞存儲(chǔ)在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低,達(dá)不到-130℃,細(xì)胞活力會(huì)立即下降。
  ATCC細(xì)胞株產(chǎn)品附帶一份產(chǎn)品資料單,其中包含細(xì)胞株的信息和詳細(xì)的操作指南。細(xì)胞株的所有詳細(xì)介紹可以在ATCC找到 ,產(chǎn)品資料單也可以在ATCC下載。此外產(chǎn)品還附帶細(xì)胞株具體生產(chǎn)批次的檢測(cè)報(bào)告,其中包含批次的特定信息,如每只凍存管中細(xì)胞的數(shù)量,無(wú)微生物污染的檢測(cè)結(jié)果等。

 

 

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